技術(shù)文章
Technical articles賽默飛世爾科技(Thermo Fisher Scientific)是生命科學(xué)領(lǐng)科研儀器和解決方案提供者,其推出的熒光定量PCR儀(qPCR)系列涵蓋了多種不同性能和應(yīng)用需求的產(chǎn)品。其中,Q5 系列(包括 Q5 和 Q5 plus 等變型)因其在多重檢測(cè)、溫控穩(wěn)定性、軟件交互和自動(dòng)化兼容方面的設(shè)計(jì),成為實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備之一。
熒光定量PCR技術(shù)自20世紀(jì)90年代以來(lái)在分子生物學(xué)、臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)等領(lǐng)域迅速普及,Q5 系列儀器作為其中的典型產(chǎn)品,提供了穩(wěn)定的擴(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)平臺(tái)。隨著設(shè)備迭代更新,一些科研機(jī)構(gòu)和企業(yè)會(huì)將舊型號(hào)設(shè)備轉(zhuǎn)為二手流通市場(chǎng),從而降低科研成本、延長(zhǎng)設(shè)備生命周期。
熒光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR)是一種結(jié)合傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增與實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)的技術(shù)。其基本工作流程包括:
模板加樣:將目標(biāo)DNA或cDNA、引物、熒光探針或染料與反應(yīng)混合液加入反應(yīng)孔中。
PCR擴(kuò)增:通過(guò)溫度循環(huán)(變性、退火、延伸)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。
熒光檢測(cè):使用熒光染料(如SYBR Green)或探針(如TaqMan)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。
數(shù)據(jù)處理:儀器軟件通過(guò)熒光信號(hào)強(qiáng)度計(jì)算閾值周期(Ct值),用于分析模板初始拷貝數(shù)。
Q5 熒光定量PCR儀的設(shè)計(jì)目標(biāo)之一,是在這一過(guò)程中確保溫控精確性和光路系統(tǒng)的靈敏度,以獲取準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)輸出。
以下是 Q5 儀器常見(jiàn)的核心參數(shù),僅供參考,實(shí)際配置可能根據(jù)出廠批次和型號(hào)略有不同:
項(xiàng)目 | 參數(shù) |
---|---|
通量 | 96孔(標(biāo)準(zhǔn)),可支持384孔(部分型號(hào)) |
樣本體積范圍 | 10–100 μL(常見(jiàn)為20–50 μL) |
溫控精度 | ±0.25°C |
升降溫速率 | 最大 5.0°C/s(依型號(hào)而異) |
熒光檢測(cè)通道 | 4–6通道(支持常見(jiàn)染料,如FAM、VIC、ROX、Cy5) |
檢測(cè)靈敏度 | 可檢測(cè)低至1拷貝/μL的DNA模板 |
軟件功能 | 可實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量、相對(duì)定量、熔解曲線(xiàn)分析、基因分型等 |
數(shù)據(jù)導(dǎo)出格式 | 支持.txt、.csv、.xls 等多種格式,便于后期數(shù)據(jù)分析 |
Q5 PCR儀采用半導(dǎo)體熱電控溫技術(shù)(Peltier加熱元件),確保每個(gè)孔內(nèi)溫度一致,減少孔間差異對(duì)結(jié)果的影響。熱蓋設(shè)計(jì)可避免樣本蒸發(fā),提高擴(kuò)增效率。
光源為高亮度LED,結(jié)合多通道濾光片,實(shí)現(xiàn)多色同步檢測(cè)。熒光信號(hào)通過(guò)高靈敏CCD傳感器接收,自動(dòng)校正背景,提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。
設(shè)備搭配專(zhuān)用分析軟件,界面清晰,支持Ct計(jì)算、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)建立、基因表達(dá)量對(duì)比分析等。部分型號(hào)可通過(guò)USB、網(wǎng)絡(luò)連接,實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程監(jiān)控與控制。
Q5 儀器支持與液體工作站等自動(dòng)化設(shè)備對(duì)接,在高通量檢測(cè)中可發(fā)揮更大作用。同時(shí),儀器外殼設(shè)計(jì)緊湊,可適應(yīng)多種實(shí)驗(yàn)臺(tái)和潔凈環(huán)境。
檢測(cè)病毒載量(如HBV、HIV)、腫瘤基因表達(dá)水平、遺傳病篩查等。
在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等領(lǐng)域,用于基因表達(dá)分析、miRNA定量等。
檢測(cè)轉(zhuǎn)基因成分、食品污染物、致病微生物等。
分析水體或土壤中的特定微生物、污染物DNA,輔助環(huán)境質(zhì)量評(píng)估。
購(gòu)買(mǎi)二手Q5熒光定量PCR儀時(shí),應(yīng)注意以下幾個(gè)方面:
確認(rèn)設(shè)備原始用途、維護(hù)記錄以及使用頻率,優(yōu)先選擇來(lái)自高?;蚩蒲袡C(jī)構(gòu)的儀器,維護(hù)相對(duì)規(guī)范。
要求供應(yīng)方提供近期設(shè)備檢測(cè)報(bào)告,包括溫控測(cè)試、光學(xué)系統(tǒng)測(cè)試、Ct值一致性測(cè)試等。
檢查熱蓋、加熱模塊、光學(xué)路徑是否完好,排除腐蝕、積塵、鏡片老化等影響性能的問(wèn)題。
確認(rèn)是否包含正版軟件及控制權(quán)限,有些儀器軟件需授權(quán)激活或聯(lián)網(wǎng)注冊(cè),需提前核實(shí)。
雖然是二手設(shè)備,仍建議選擇提供質(zhì)保期和技術(shù)支持的渠道,避免后續(xù)無(wú)法維護(hù)或無(wú)法替換配件的情況。
每次使用后應(yīng)清潔樣本托盤(pán)和熱蓋,避免殘留影響下次實(shí)驗(yàn)。
定期校準(zhǔn)溫控系統(tǒng)與熒光通道,確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
軟件操作時(shí)嚴(yán)格遵守用戶(hù)手冊(cè)要求,避免誤操作導(dǎo)致系統(tǒng)故障。
對(duì)使用頻率較高的實(shí)驗(yàn)室,建議設(shè)立維護(hù)日志,記錄設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)及異常情況。
與同類(lèi)熒光定量PCR儀相比(如ABI QuantStudio、Bio-Rad CFX系列等),Q5 具有以下特點(diǎn):
溫控均一性較好,適合對(duì)擴(kuò)增效率敏感的實(shí)驗(yàn);
光路系統(tǒng)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單,日常維護(hù)相對(duì)便捷;
界面操作風(fēng)格直觀,學(xué)習(xí)成本低;
二手市場(chǎng)存量相對(duì)豐富,零部件可替換性強(qiáng)。
但同時(shí)也存在一些限制,如部分老型號(hào)軟件更新不及時(shí),部分功能如高階熔解曲線(xiàn)分析需額外模塊支持等。
二手賽默飛 Q5 熒光定量PCR儀作為一款經(jīng)典的實(shí)時(shí)定量擴(kuò)增檢測(cè)平臺(tái),在科研及檢測(cè)應(yīng)用中具有一定實(shí)用價(jià)值。通過(guò)合理選擇、規(guī)范維護(hù),其仍可滿(mǎn)足日?;蚨糠治龅亩鄶?shù)需求。對(duì)于預(yù)算有限或在構(gòu)建初期實(shí)驗(yàn)室的用戶(hù)而言,是一項(xiàng)具有性?xún)r(jià)比的設(shè)備選擇。